Оглавление

Микробиология Лекции ИД Равновесие
Микробиология Лекции ИД Равновесие

Вопрос 41. Вирусные инфекции. методы диагностики


1. Вирусные инфекции человека В настоящее время вирусные инфекции составляют преобладающую часть инфекционной патологии человека. Самыми распространенными среди них остаются острые респираторные (ОРВИ) и другие вирусные инфекции, передаваемые воздушно-капельным путем, возбудители которых относятся к абсолютно различным семействам, чаще всего это РНК-содержащие вирусы (вирус гриппа А, В, С, вирус эпидемического паротита, вирусы парагриппа, вирус кори, риновирусы и другие).
Не менее распространены и кишечные вирусные инфекционные заболевания, вызываемые вирусами, также относящимися к различным семействам РНК-содержащих и ДНК-содержащих вирусов (энтеровирусы, вирус гепатита А, ротавирусы, калициновирусы и другие).
Широко распространены во всем мире такие вирусные инфекционные заболевания, как вирусные гепатиты, особенно гепатит В, передаваемый трансмиссивным и половым путем. Их возбудители - вирусы гепатита А, В, С, D, Е, G, TT относятся к разным таксономическим группам (пикорнавирусов, гепаднавирусов и другие), имеют разные механизмы передачи, но все обладают тропизмом к клеткам печени.
Одной из самых известных вирусных инфекций является ВИЧ-инфекция (часто называемая СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита, который является ее неизбежным исходом). Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) - возбудитель ВИЧ-инфекции, относится к семейству РНК-вирусов - Retroviridae, роду лентивирусов.
Весьма распространенны в настоящее время арбовирусные инфекционные заболевания. Естественными хозяевами их возбудителей являются мелкие грызуны и их эктопаразиты. Человеку эти вирусы передаются через укусы кровососущих насекомых, т. е. переносчиками являются членистоногие, поэтому и называются все эти вирусы, независимо от их таксономической принадлежности арбовирусами.
Большинство из них - РНК-содержащие, входят в семейства - тога-, флави-, буньявирусов и являются возбудителями энцефалитов и геморрагических лихорадок. Возбудителями тяжелых форм геморрагических лихорадок (лихорадки Эбола, Марбургская лихорадка и другие) являются фило-, аденовирусы. Но трансмиссивный путь заражения при этих инфекционных заболеваниях не являются единственным. Вышеназванные инфекции в основном представляют собой эндемичные заболевания, но тяжелые вспышки некоторых из этих заболеваний (крымской геморрагической лихорадки, лихорадки западного Нила) имели место в Ростовской и Волгоградской области летом 1999 года.
Кроме инфекционной патологии человека, доказана роль вирусов и в развитии некоторых опухолей животных и человека (онкогенные или онковирусы). Среди известных вирусов, обладающих онкогенным действием, есть представители как ДНК-содержащих (из семейства паповавирусов, герпесвирусов, аденовирусов, поксвирусов), так и РНК-содержащих (из семейства ретрорвирусов, род пикорновирусов) вирусов.
2. Лабораторная диагностика вирусных инфекций Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используются различные методы.
Вирусологическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия - сами вирионы, и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ротавирусную).
Вирусологическое исследование направлено на выделение вируса и его идентификацию. Для выделения вирусов используют заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей.
Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семейства можно провести с помощью:

  • определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиуридоном),

  • особенностей ее строения (электронная микроскопия),

  • размером вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм),

  • наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром),

  • гемагглютининов (реакция гемагглютинации),

  • типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия).

  • Результаты оцениваются по заражению культуры ткани пробой, подвергнутой соответствующей обработке, и с последующим учетом результатов заражения методом цветной пробе фильтрования. Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусонейтрализации с соответствующими иммунными сыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологическую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивается так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, результатам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутствию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживаемости чувствительных животных.
    Вирусологическое исследование - это "золотой стандарт" вирусологии и должно проводится в специализированной вирусологической лаборатории. В настоящее время оно используется практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания.
    Для диагностики вирусных инфекций широкое применение нашли методы иммунодиагностики (серодиагностики и иммуноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакциях иммунитета:

  • радиоизотопный иммунный анализ (РИА),

  • иммуноферментный анализ (ИФА),

  • реакция иммунофлюоресценции (РИФ),

  • реакция связывания комплемента (РСК),

  • реакция пассивной гемагглютинации (РПГА),

  • реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и другие.

  • При использовании методов серодиагностики обязательным является исследование парных сывороток. При этом четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперенесенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет обнаружение антител класса Ig М, свидетельствующее об острой инфекции.
    Большим достижением современной вирусологии является внедрение в практику диагностики вирусных инфекций молекулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимеразной цепной реакции - ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие вирусы, находящиеся в клиническом материале, с трудом обнаруживаемые или не обнаруживаемые другими методами.
    Микробиология Лекции ИД Равновесие

    LUXDETERMINATION 2010-2013