Микробиология Лекции ИД Равновесие
|
|
|
|
Вопрос 74. Возбудитель лейшманиоза
1. Характеристика лейшманий Лейшманиоз - это протозойное трансмиссивное заболевание человека и животных, при котором поражаются внутренние органы (внутренний лейшманиоз) или кожа и слизистые оболочки (кожный лейшманиоз).
Возбудители относятся к семейству трипаносом, роду лейшманий - паразиты из класса жгутиковых. Жизненный цикл лейшманий протекает со сменой хозяев в виде двух стадий:
При исследовании появившихся бугорков при кожном лейшманиозе протирают кожу спиртом и производят укол по направлению к середине бугорка. Из выступившей капли серозно-кровянистой жидкости готовят на предметных стеклах мазки, высушивают, фильтруют и окрашивают по Романовскому. При исследовании язвы с обильным отделяемым материал для исследования с поверхности брать не рекомендуется, так как обильная бактериальная флора и большое количество распавшихся клеток затемняют картину, поэтому материал берут путем пункции в приподнятый неизъязвившийся край язвы по направлению ко дну язвы. Из содержимого готовят мазки, высушивают, фиксируют и окрашивают по Романовскому. При внутреннем лейшманиозе исследованию подвергают пунктат костного мозга или усиленного лимфатического узла.
3. Микроскопическое исследование Микроскопическое исследование - окрашенные мазки исследуют с иммерсионной системой. В мазках обнаруживаются лейшманиальные формы паразита. Эти стадии паразита имеют сферическую или чаще овоидную форму. Размер 2-6 мкм, ядро одно, лежит в середине клетки, около ядра находится протопласт в виде короткой палочки или крупного кокка. По Романовскому цитоплазма окрашивается в голубой цвет, ядро - в красный, блефаропласт - в вишнево-красный более темный цвет, чем ядро. Паразиты наблюдаются в препарате как свободно лежащими, так и в цитоплазме больших одноядерных клеток типа макрофагов и других ретикуло-эндотелиальных клеток.
4. Бактериологическое исследование Бактериологическое исследование - серозно-кровянистую жидкость из язвы вносят на среду ННН (агар + поваренная соль + дефибринированная кровь кролика).
Засеянные пробирки выдерживают при температуре 22-25 °С. Для предотвращения высыхания среды ватные пробки пробирок заливают горячим парафином. Рост в виде мелких прозрачных колоний, впоследствии сливающихся, обнаруживаются на 3-4-й день. Без пересева культуру можно сохранить 3-4 недели и дольше. При посеве с поверхности агара петлей снимают отдельные колонии и засевают в пробирки со свежей средой на поверхность агара. В культуре лейшмании представлены в виде лептомонадных форм. Они имеют удлиненное ланцетовидное тело размером 10-14 х 4-5 мкм с ядром в средней части тела и блефаропластом, лежащим около переднего конца тела паразита. От блефаропласта, начинается свободно выходящий через передний конец тела клетки жгут, в 1,5 раза длиннее тела паразита. Часть лептомонадных форм часто собирается в розетки (жгутами к центру) по 10-15 экземпляров. В старых культурах наблюдаются формы, лишенные жгута, в виде овальных, иногда круглых образований размером 4 х 5 мкм.
Серологические исследования - используются реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментная агглютинация (ИФА).
5. Биологическая проба Биологическая проба - возбудитель кожного лейшманиоза (мокнущая форма) человека может быть экспериментально привит белым мышам, песчанкам и хомякам. У последних часто развивается генерализованная инфекция. Материалом для заражения служат клетками из язвы или из культуры. Лейшманий из культуры вводят внутрикожно. Через 10-20 дней на месте введения лейшманий развивается инфильтрат, содержащий стадии паразита.