Микробиология Лекции ИД Равновесие
|
|
|
|
Вопрос 65. Лабораторная диагностика туляремии людей
1. Особенности лабораторной диагностики туляремии Организм человека восприимчив к туляремии. У человека туляремия - лихорадочное заболевание с относительно доброкачественным течением, не представляющее опасности заражения для окружающих. Летальность при туляремии в России ниже 0,5 % (без лечения). Для диагностики туляремии у больного вполне достаточно применение двух реакций, кожной пробы и реакции агглютинации. Другие иммунологические реакции технически более сложны (например, реакция связывания комплемента).
Выделение от больного культуры возбудителя доступно лишь специально оснащенным лабораториям и применяются в основном с исследовательскими целями. Для обнаружения туляремийных бактерий в органах животных и объектах внешней среды в лабораторной практике чаще всего используют бактериологические методы исследования материала. Грызунов, кровососущих членистоногих доставляют в лабораторию для исследования с соблюдением предосторожностей, предусмотренных правилами работы с особо опасными инфекциями.
Бактериологический метод для диагностики заболевания у человека по сравнению с биологическим методом малоэффективен, так как в организме больного человека туляремийные микробы содержаться в скудном количестве. Для выращивания туляремийных бактерий используют специальные среды, так как на простых питательных средах (мясопептонном агаре, бульоне) этот микроб не растет, обычно применяется свернутая желточная среда, рыбно-глюкозо-цистиновый агар и агар с добавлением крови. При массивном обсеменении органов рост культуры туляремийных бактерий появляется через 18-24 ч в виде нежного синего налета на поверхности среды.
2. Бактериоскопия Бактериоскопия ввиду очень мелких размеров туляремийного микроба он может быть с достоверностью обнаружен в мазках-отпечатках из патологического материала только при обильном обсеменении последнего. При изготовлении мазков-отпечатков используют окраску по Романовскому-Гимза. Путем бактериоскопии (в сочетании с реакцией преципитации) может быть получен быстрый (через 2-3 ч) положительный ответ при исследовании доставленных грызунов. Однако он является лишь предварительным, так как положительные результаты бактериоскопического исследования должны быть подтверждены выделением культуры.
3. Серологические исследования Серологические исследования- из серологических методов исследования применяют реакцию агглютинации по общепринятой методике с использованием туляремийного диагноста. Диагностическим считается титр 1 : 100 и выше. Более чувствительной является реакция непрямой гемагглютинации, применяемая как для ранней, так и для ретроспективной диагностики. В качестве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум.
Ускоренный метод серологической диагностики туляремии. Для этой цели применяют кровяно-капельную реакцию на стекле. В качестве антигена используют обычный туляремийный диагностикум. В положительных случаях при наличии у больного титра сыворотки 1 : 100 и выше агглютинация на стекле наступает немедленно после смешения крови с антигеном. Для ускоренной диагностики туляремии у людей может быть использована также микросерореакция. Для ее постановки на предметное стекло наносят не каплю крови, а каплю сыворотки крови обследуемого больного и к ней добавляют столько же антигена. Положительная микрореакция на стекле может служить для предварительной ориентации в диагнозе.
4. Проба с тулярином Аллергическая реакция строго специфична, у больных туляремией людей она становиться положительной при всех химических формах туляремии и, как правило, опережает реакцию агглютинации. Проба состоит во введении внутрикожно в область предплечья, передней поверхности 0,1 мл тулярина (взвесь убитых туляремийных микробов). Оценку пробы производят через 24, 48 и 72 ч. Проба является положительной при появлении отека или инфильтрата. Гиперемия без отека, исчезающая через сутки, диагностического значения не имеет. Внутрикожную пробу применяют и для ретроспективной диагностики туляремии. Надо иметь в виду, что проба с тулярином бывает положительной у лиц, подвергшихся прививкам туляремийной вакциной. Вместо внутрикожной пробы пользуются накожной пробой: нанесением двух капель антигена на ладонную поверхность предплечья с последующими поверхностными насечками и легким втиранием антигена. В положительных случаях через 24-36 ч появляются гиперемия и отечность, сохраняющихся 2-3 дня.
5. Биологический метод Биологический метод является самым чувствительным способом обнаружения туляремийных бактерий в любом исследуемом материале. Биологический метод исследования заключается в заражении лабораторных животных (морская свинка, белая мышь) результатом бубонов, взятым до 14-20-го дня болезни; соскобом со дна язвы, смешанным с физиологическим раствором, полученным до 8-12-го дня, отделяемым конъюнктивы, взятым до 15-17-го дня болезни; кровью 5-6 мл, взятой до 6го дня болезни. Исследуемый материал вводят подопытным животным подкожно или внутрибрюшно. Зараженные животные погибают от туляремии в течении 4-14 дней. Кусочки печени, селезенки, лимфатического узла и кровь засевают на желточную среду для выделения возбудителя.