Микробиология Лекции ИД Равновесие
|
|
|
|
Вопрос 59. Лабораторная диагностика малярии
1. Обнаружение плазмодиев в толстой капле и мазке крови Паразитологический диагноз малярии основан на обнаружении паразитов в окрашенных препаратах (толстая капля и мазок) крови. Паразиты могут присутствовать в крови не только во время лихорадочных приступов и промежутков между приступами, следующими один за другим, но и в течении длительных периодов, на протяжении которых не наблюдается повышения температуры.
Наличие паразитов в крови при отсутствии лихорадочных приступов называется паразитоносительством. Такие люди заразны для комаров. При массовых обследованиях следует брать кровь вне зависимости от наличия приступов.
Техника приготовления и окраски мазка - мазок готовят как обычно. После того как мазок высохнет, его фиксируют в 96 % этиловым спирте 15 мин. Или в метиловом спирте в течение 3 мин. Высушенные после фиксации мазки окрашивают краской Романовского, разведенной дистиллированной водой. Окрашивают в течение 30-50 мин, в зависимости от качества краски. После окрашивания препарат споласкивают водой и высушивают на воздухе.
Техника приготовления и окраски толстой капли. На стекле приготовляют мазок, а потом на еще влажный мазок дают упасть капле крови. Капля равномерно растекается, образуя круг. После того как капля высохнет, на мазке простым карандашом делают соответствующую отметку. Препарат без фиксации окрашивают. Затем осторожно (чтобы не смыть каплю) препарат споласкивают водопроводной водой и высушивают. Мазки и толстые капли микроскопируют имммерсионной системой.
2. Морфология малярийных паразитов в мазке и толстой капле Морфология малярийных паразитов в мазке крови. Мерозоит, внедрившись в эритроцит, превращается в молодой шизонт, обозначаемый как кольцо. Затем паразит, увеличиваясь, принимает амебовидную форму, при этом сохраняется просвет (вакуоль) между ядром паразита и основной частью его цитоплазмы. В цитоплазме паразита появляются зерна пигмента. Амебовидный шизонт заполняет значительную часть эритроцита, затем начинает округляться, вакуоль исчезает (стадия подготовки к делению), пигмент начинает собираться в отдельные пучки.
Для пллазмодия малярие шизонты - лентовидные формы. Ядро паразита начинает делиться, а затем цитоплазма паразита делится так, что к каждому дочернему ядру прилегает отдельный комочек цитоплазмы (меруляция). В результате получается кучка мерозоитов - морула. Пигмент на стадии морулы собран в одну компактную кучу.
У пл. фальсипарум скучивание пигмента наступает еще до полного формирования морулы. Мерозоиты расходятся, попадают в плазму крови, часть из них погибает, часть внедряется в новые эритроциты.
Гамонты. Форма гамонтов у всех малярийных паразитов, за исключением тропической малярии, круглая или слегка овальная.При тропической малярии плазмодий имеет вытянутые гамонты с закругленными концами. Мужские и женские гамонты различаются между собой по величине и структуре ядра интенсивности окраски цитоплазмы). Женские гамонты - ядро небольшое, компактное; цитоплазма красится в интенсивный голубой цвет. Мужские гамонты - ядро большое, цитоплазма красится бледно, часто зона вокруг ядра принимает фиолетовый оттенок.
Морфология малярийных паразитов в толстой капле. В толстой капле, поскольку ее окрашивают в нефиксированном виде, эритроциты выщелачиваются, а малярийные паразиты претерпевают значительную деформацию. При четырехдневной и тропической малярии пораженные эритроциты в толстой капле выщелачиваются полностью, также как и нормальные. При трехдневной малярии в толстой капле строма эритроцитов сохраняется и диагностика малярийного паразита по толстой капле облегчается. Кольца в толстой капле обычно смяты, вытянуты в виде восклицательного знака, иногда разорваны в виде запятой. Амебовидные шизонты часто бывают уплотненными, лентовидные шизонты четырехдневной малярив толстой капле округляются и не отличимы от амебовидных шизонтов. Морулы распознаются в толстой капле легко.
Цитоплазма паразитов в результате воздействия химиотерапевтических препаратов окрашиваются слабее, приобретает стекловидный оттенок, становится вакуолизированной, распадается на отдельные комочки, ядро становится рыхлыми или наоборот более компактными. Иногда пигмент собирается в кучки, выталкивает из паразита. В толстых каплях распознавание таких подвергшихся деформации паразитов становится более трудным, а иногда и невозможным.
Серологическая диагностика малярии включает иммуноферментную агглютинацию, реакцию непрямой гемагглютинацию и другие, которые имеют наибольшее значение в неэндемичных районах.
3. Ошибки диагностики В мазках крови и толстых каплях малярийные паразиты могут быть приняты за мерозоит, скопление бляшек может симулировать морулу. В препаратах, окрашенных по Романовскому, бляшки отличаются от мерозоитов по следующим признакам: мерозоит состоит из красного ядра и голубой цитоплазмы. Фон бляшки в мазке иногда окрашивается в бледно-голубой цвет, однако ее зернистость принимает красный цвет более светлого оттенка, чем у ядер мерозоитов.
В препаратах могут быть обнаружены также посторонние микроорганизмы, по форме напоминающие малярийных паразитов: грибки, одноклеточные водоросли, свободноживущие простейшие. Некоторые одноклеточные формы с компактным ядром в центре, окрашивающимся по Романовскому в ярко-красный цвет, симулируют гамонты тропической малярии. Их легко отличить по отсутствию пигмента. Свободно живущие простейшие с одним или несколькими жгутами могут быть приняты за стадию образования мужских гамет малярийного паразита.
4. Исследование комаров на зараженность малярийными паразитами Комаров вскрывают и определяют наличие ооцист на желудке и спорозоитов в слюнных железах. Ооцисты видны в нативных препаратах.
Незрелые ооцисты выглядят в таких препаратах, как круглые гомогенные образования с пигментом, состоящим из нескольких глыбок.
В зрелых ооцистах видны хорошо сформировавшиеся спорозоиты, тесно прилегающие друг к другу. Ряды спорозоитов в виде частокола располагаются по отношению друг к другу под разными углами, в результате чего ооциста приобретает мозаичный вид, при надавливании покровного стекла из ооцист выходят спорозоиты.
В слюнных железах спорозоиты расположены рядами перпендикулярно к протоку слюнных желез, а также в виде конгломератов. В секрете слюнных желез спорозоиты попадают в окружающую жидкость, в которой хорошо заметны вследствие их подвижности.