Микробиология Лекции ИД Равновесие
|
|
|
|
Вопрос 57. Возбудители кокковых пневмоний. Лабораторная диагностика
1. Возбудители пневмоний Возбудителями пневмонии могут быть различные микроорганизмы, проникающие в дыхательные пути человека из окружающей среды - кокковые (пневмококки, стрептококки, стафилококки) и бациллярные (диплобациллы Флидлендера, палочки Пфейффера). Одним из наиболее частых возбудителей пневмонии, особенно крупозной, является пневмококк. В последнее время часты стафилококковые пневмонии.
2. Забор материала для исследований. Микроскопия мазков Материалом для исследования служат: мокрота, слизь, взятая стерильным тампоном из носоглотки больного, гной, различные выпоты, пунктаты, кровь. Исследованию подвергают преимущественно мокроту или носоглоточную слизь.
Микроскопическое исследование -делают мазки на двух предметных стеклах; один из мазков окрашивают по Граму, а другой - разведенным карболовым фуксином (краска Пфейффера). При нахождении в мазках ланцетовидных диплококков, окруженных светлой зоной неокрасившейся капсулы ориентировочно устанавливают пневмококковую этиологию. Обнаружение расположенных цепочкой грамположительных кокков позволяет подавить предварительный диагноз стрептококковой инфекции. Характерная морфология расположения группами в виде гроздей винограда и положительной окраски по Граму позволяют установить наличие стрептококков. Обнаружение в мазках мелких грамотрицательных палочек, часто образующих гнездные скопления и нередко полярно окрашенных, указывает на палочку Пфейффера. Грамотрицательные диплобациллы различной величины, окруженные капсулой в виде светлого ореола, говорят о наличии диплобациллы Фридлендера. Микроскопический диагноз ориентировочный и предварительный.
3. Бактериологическое исследование Точное представление о микробном пейзаже дает:
Одновременно с изучением внешнего вида колоний производят отсев их в жидкие среды и микроскопирование. Колонии пневмококков на кровяном агаре имеют вид мелких полупрозрачных образований зеленовато-серого цвета, особенно заметного в тонком слое агара, в центре имеют небольшой плотный бугорок и более светлую периферию. Нередко колонии окружены как бы отсвечивающим ореолом. В жидких средах пневмококки вызывают равномерное помутнение без образования пленок и осадка.
Микроскопирование обнаруживает грамположительные парные кокки несколько удлиненной формы с заостренными наружными концами, напоминающими ланцет - ланцетивидные диплококки. Размеры их колеблются в пределах 0,5 на 0,75 до 1 на 1,5 мкм, располагаются одиночно, но могут образовывать короткие цепочки по 3-4 пары кокков. Пневмококки образуют капсулу, которая светлым ободком окружает оба кокка вместе, так как обычными методами окраски капсула не прокрашивается. Пневмококки легко лизируются в присутствии бычьей желчи и желчнокислых солей. Обнаруженные при исследовании культуры пневмококка подвергают дополнительному исследованию - определяют тип пневмококка, вирулентность для белых мышей и устойчивость к действию антибиотиков, а также производят серологические исследования (реакции агглютинации и преципитации - материал от больного берется и типовые пневмококковые сыворотки). Одновременно с посевом на агар исследуемый материал вводят внутрибрюшинно 2 белым мышам весом 18-20 г по 0,5 мл - т. е. ставят биологическую пробу.
4. Особенности лабораторной диагностики стафилококковых пневмоний Стафилококковая пневмония. Бактериологическое исследование проводится с использованием молочно-солевого и кровяного агара. Для обнаружения стафилококков пользуются материалом (пунктат, выпоты, гной, экссудат), взятым непосредственно из очага болезни (плевральные и легочные полости) а также посевами крови, производимыми в строго стерильных условиях.
Исследования слизи из зева и носа имеют второстепенное значение и лишь дополняют общую картину. 2-3 капли исследуемого материала помещают на поверхность чашки, содержащей молочно-солевой агар, посевы помещают в термостат при 37°. Посевы крови сохраняют в термостате до появления роста (помутнении). Если в течении 4-5 дней роста микробов не обнаруживается, считают отрицательными и уничтожают. Через сутки роста посевы извлекают из термостата и выросшие культуры подвергают изучению.
Колонии стафилококков на твердых средах представляют собой правильные диски с ровными краями, блестящей, умеренно выпуклой поверхностью. Размером от 2 до 4 мм в диаметре. Колонии легко снимаются с агара, немного тягучи, непрозрачны, окрашены в золотисто-оранжевый, лимонно-желтый или белый цвет. На кровяном агаре патогенные штаммы стафилококков, как правило, окружены зоной более или менее выраженного гемолиза. В жидких средах стафилококки вызывают сильное диффузное помутнение, некоторые штаммы с образованием пленки. При стоянии пробирки на дне образуется осадок. Стафилококки грамположительны.
Под микроскопом стафилококки представляют собой довольно правильные сферические кокки с диаметром 0,6 до 0,9 мкм. Располагаются одиночно, попарно и даже короткими цепочками по 2-4 кокка, но основной формой являются неправильные скопления, напоминающие гроздья винограда.
Патогенные штаммы выглядят, как правило, лиловыми, а непатогенные - интенсивно синими. Выделенные из одной колонии штаммы культур стафилококка исследуют на патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам. Из посевов крови ежедневно делают высевы на гемоагар и выделенные культуры подвергают тем же исследованиям.
Понятие о патогенности стафилококковой культуры складывается из комплекса свойств изучаемого штамма:
Серологическое исследование - наибольшее распространение получило определение уровня стафилококкового антитоксина в сыворотке больных в динамике, т. е. вначале и конце болезни. Принцип титрования основан на нейтрализации гемолитических свойств стафилококкового токсина антитоксином, содержащимся в сыворотке больного. Обычно при наличии стафилококкового заболевания уровень антитоксина в крови больных нарастает в течении болезни, что подтверждает этиологическую роль стафилококка в данном заболевании. У резко ослабленных субъектов нарастание титра антитоксина может и не наблюдаться.