Микробиология Лекции ИД Равновесие
|
|
|
|
Вопрос 49. Лабораторная диагностика дифтерии
1. Забор и посев материала Лабораторная диагностика дифтерии производится с целью:
Посев необходимо произвести сразу после взятия материала (не позже 5-6 ч) в пробирку со свернутой кровяной сывороткой и сывороткой Леффлера,а затем поставить в термостат при 37 °С.
2. Бактериоскопическое и бактериологическое исследования Через 18-20 ч роста в положительных случаях на поверхности среды видны многочисленные бисерные, близко расположенные друг к другу колонии. Предварительный диагноз можно дать уже через 8 ч. Материал с тампона можно засеять на чашку с кровяным теллуровым агаром или на среду Клауберга II. Колонии, выросшие на чашках через 24-48 ч, изучают микроскопически и отсевают на чашки Петри со специальной средой для определения токсичности. На следующие сутки учитывают результаты посева культур на средах для определения токсичности и биохимических свойств и микроскопируют чистую культуру со свернутой сыворотки. Если выделена разлагающая углеводы нетоксичная культура, необходимо поставить дополнительные пробы на цистиназу и реакцию агглютинации с политиповой дифтерийной сывороткой. Реакцию агглютинации ставят на стекле с помощью монотиповых дифтерийных сывороток.
3. Реакции ферментации углеводов Для идентификации чистой культуры дифтерийной палочки и дифференцировки ее от псевдодифтерийной палочки Гормана исследуют биохимические свойства выделенной чистой культуры. Исследование проводится на средах Гисса или на водно-сывороточной среде (20 %-ной лошадиной сыворотке).
Дифтерийная палочка расщепляет только глюкозу - имеет только столбик, дифтероиды ферментируют глюкозу и сахарозу - синий цвет будет у всей среды, ложнодифтерийная палочка не расщепляет сахаров, но разлагает мочевину - вся среда приобретает оранжевый цвет. На основании реакций ферментации углеводов можно также установить два основных биологических типа дифтерийной палочки: гравис и митис. Формулировка окончательного ответа при положительном анализе: "Выделены токсичные (нетоксичные) дифтерийные палочки", в случае изучения культурально-биохимических признаков указывается принадлежность к типу гравис или митис, а при серотипировании культуры указывается серологический тип.