Статьи Лабораторная диагностика
|
|
|
|
Методы количественной оценки числа лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров в моче и степени бактериурии
В основе лабораторной диагностики мочевого синдрома при многих воспалительных заболеваниях почек и мочевыводящих путей лежит выявление лейкоцитурии, эритроцитурии и цилиндрурии.Однако при скрыто протекающих, латентных формах этих заболеваний, общий клинический анализ мочи нередко оказывается малоинформативным, поскольку экскреция этих элементов мочевого осадка может существенно колебаться в течение суток. В тех случаях, когда исследование одной порции мочи, собранной за относительно короткий промежуток времени, не позволяет выявить достоверные лабораторные признаки воспалительного процесса в почках и мочевыводящих путях, целесообразно использовать методы количественного подсчета числа лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров.
Проба Каковского-Аддиса
Мочу собирают в течение суток в отдельную емкость. В мочу добавляют консервант (4–5 капель формальдегида или 1 г тимола, или 10,0 мл карболовой кислоты) и желательно хранить мочу в холодильнике, чтобы предупредить размножение микроорганизмов и, соответственно, сдвиг рН в щелочную сторону, что приводит, как известно, к быстрому распаду форменных элементов.
Если нет возможности соблюдать эти условия, мочу собирают за 10 часов. Для этого вечером в 22 ч пациент опорожняет мочевой пузырь. Эту порцию мочи выливают. В течение последующих 10 часов больной не мочится, а затем в 8 ч утра одномоментно собирает всю мочу, которую посылают в лабораторию для исследования.
Собранную мочу перемешивают и измеряют ее объем (V). Затем рассчитывают количество мочи, полученное за 12 минут (1/5 часа). Расчет ведут по следующей формуле:
Q = V / t x 5 (мл)
•Q - объем мочи, выделенный за 12 минут (мл)
•V - объем мочи, собранный за время исследования (мл)
•t - время сбора мочи (24 или 10 ч)
•5 - коэффициент перерасчета за 1/5 ч (12 минут)
Рассчитанное таким образом количество мочи центрифугируют и получают осадок. Надосадочную жидкость удаляют, оставляя в пробирке 0,5 мл мочи (500 мкл) с осадком. Это количество мочи и осадок перемешивают и заполняют им счетную камеру (например камеру Горяева). После этого под микроскопом по методике, описанной выше, подсчитывают количество лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров в 1 мкл осадка мочи.
Количество форменных элементов в 1 мкл мочи рассчитывают по формуле:
X = A / 0,9
•Х - число форменных элементов в 1 мкл
•А - число форменных элементов, подсчитанных во всей камере
•0,9 - объем камеры Горяева (в мкл)
Количество форменных элементов, выделенных за сутки, рассчитывают по следующей формуле:
B = X x 500 x 5 x 24
или
B = 60000 x X
•В - число форменных элементов, выделенных за сутки
•Х - число форменных элементов в 1 мкл
У здорового человека в течение суток с мочой выделяется:
•до 2,0 x 106 лейкоцитов
•до 1,0 x 106 эритроцитов
•до 2,0 x 104 цилиндров
Проба Нечипоренко
Метод основан на определении количества форменных элементов в 1 мл мочи. Мочу для исследования берут в любое время суток (лучше утром). Для исследования достаточно 5–10 мл мочи, полученной в середине мочеиспускания. Больной мочится в унитаз, затем в специально подготовленную пробирку, после этого снова в унитаз.
Мочу центрифугируют, отделяют верхний слой надосадочной жидкости, оставляя вместе с осадком 0,5 мл (500 мкл) мочи. Осадок перемешивают и заполняют им счетную камеру. Под микроскопом отдельно подсчитывают лейкоциты, эритроциты и цилиндры.
Вначале рассчитывают количество форменных элементов в 1 мкл осадка мочи по вышеприведенной формуле:
X = A / 0,9
затем рассчитывают количество форменных элементов в 1 мл мочи:
N = X x 500 / V
•N - число форменных элементов в 1 мл мочи
•Х - число форменных элементов в 1 мкл мочи (вместе с осадком)
•500 - объем мочи (в мкл), оставленной в пробирке вместе с осадком
•V - количество мочи, взятой для центрифугирования (в мл)
Метод подсчета форменных элементов в моче по А. З. Нечипоренко дает менее точные результаты, чем метод Каковского-Аддиса, и не позволяет определить суточную экскрецию форменных элементов.
В норме в 1 мл мочи содержится не более:
•2 x 103 лейкоцитов
•1 x 103 эритроцитов
•цилиндры по этой методике практически не обнаруживаются
Преднизолоновый тест
Когда при латентном течении пиелонефрита лейкоцитурия не выявляется не только в общем анализе мочи, но и при выполнении количественных методов исследования мочи по Каковскому-Аддису и Нечипоренко (особенно когда клиническая картина заболевания не позволяет исключить патологический процесс в почках и мочевыводящих путях) для уточнения диагноза целесообразно проведение провокационных тестов, вызывающих активацию воспалительного процесса в почках. К числу таких методов относится преднизолоновый тест.
Преднизолоновый тест основан на активации воспалительного процесса в почках и, соответственно, увеличении лейкоцитурии при внутривенном введении 30 мг преднизолона. Число лейкоцитов в осадке мочи до и после введения преднизолона определяют по методу Нечипоренко.
Методика проведения теста. Утром больной опорожняет мочевой пузырь, мочу выливают. Через 1 ч собирают контрольную порцию мочи и внутривенно вводят 30 мг преднизолона в 10–20 мл изотонического раствора натрия хлорида. После этого с интервалами в 1 ч больной трижды собирает мочу по описанной методике. Последнюю порцию мочи для исследования по Нечипоренко берут через 24 ч после введения преднизолона. В каждой порции мочи подсчитывают количество лейкоцитов в 1 мл мочи, а также определяют «активные» лейкоциты.
Оценка результата. Если хотя бы в одной из 4-х порций мочи, взятых после введения преднизолона, обнаруживают двукратное увеличение числа лейкоцитов в осадке мочи по сравнению с контролем, а также «активные» лейкоциты, пробу считают положительной.
Трехстаканная проба
Эта проба была предложена для уточнения локализации источника гематурии и лейкоцитурии (почки или мочевыводящие пути).
Считают, что:
•при поражении уретры патологический осадок (лейкоциты, эритроциты) появляются в первой порции мочи
•при поражении почек, чашечно-лоханочной системы или мочеточников характерно появление патологического осадка во всех трех порциях мочи или в третьей и второй порциях
•при локализации патологического процесса в мочевом пузыре гематурия или лейкоцитурия обнаруживается, главным образом, в третьей порции мочи
Хотя трехстаканная проба проста и не обременительна для больного, ее результаты имеют лишь относительное значение для дифференциальной диагностики ренальной и постренальной гематурии и лейкоцитурии. Например, в некоторых случаях при поражении мочевого пузыря (постоянно кровоточащая опухоль и др.) гематурия может выявляться во всех трех порциях мочи, а при поражении мочеиспускательного канала — не в первой, а в третьей порции (терминальная гематурия) и т. д.
Бактериологическое исследование мочи
В диагностике многих инфекционных воспалительных заболеваний почек и мочевыводящих путей большое значение имеют различные методы бактериологического исследования мочи. Наиболее точное представление о степени бактериурии, виде возбудителя и его чувствительности к антибиотикам дает посев мочи на твердые питательные среды.
Мочу для бактериологического исследования необходимо собирать в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Для исследования используют мочу, полученную в середине мочеиспускания (среднюю порцию). Наиболее простым и доступным способом количественной оценки степени бактериурии является метод Гоулда. В стерильную чашку Петри с твердой питательной средой стандартной петлей вносят мочу (сектор А). Затем новой стерильной петлей проводят 4 полосы из сектора А в сектор I, из него в сектор II, а затем — в сектор III. Каждый раз берут новую простерилизованную петлю. Чашки Петри помещают на 18–24 ч в термостат при температуре 37°С. После этого оценивают результаты исследования, подсчитывая число колоний в различных секторах чашки Петри. Чем выше степень бактериурии, тем больше рост колоний в секторе I, II и даже в секторе III.
Если в секторе 1 появляется рост от 5 до 10 колоний, это соответствует концентрации бактерий около 100 000 м. т. в 1 мл мочи. При росте от 20 до 30 колоний бактериурия достигает 500 000 м.т. в 1 мл, а от 40 до 60 колоний – около 1 000 000 м.т. в 1 мл мочи.
Если рост колоний наблюдается также в секторе 2 (10–20 колоний), количество бактерий достигает 5 000 000 м. т. в 1 мл мочи и т. д.
Далее, колонии, выросшие на плотной питательной среде, отсевают в пробирки с агаром, идентифицируют выделенную чистую культуру и определяют ее чувствительность к антибиотикам.