Статьи Лабораторная диагностика
|
|
|
|
С-реактивный белок
… является самым чувствительным (увеличение в 20-100 раз, в отдельных случаях в 1000 раз) и самым быстрым (в первые 6-8 часов) показателем какого-либо повреждения (воспаления).С-реактивный белок (далее - СРБ) был открыт Tilet и Francis (1930) в плазме пациентов, больных пневмонией, и был так назван из-за своей способности связывать и осаждать С-полисахарид пневмококков (один из механизмов ранней защиты организма от инфекции).
СРБ состоит из пяти отдельных субъединиц, образующих за счет нековалентных связей циклическую пентамерную структуру с молекулярной массой, варьирующей от 110000 до 140000 Да. СРБ, синтезируется в печени и присутствует в крови в норме практически у всех здоровых лиц (около 1 мкг/мл) при отсутствии воспалительного процесса. У здоровых индивидуумов уровень сывороточного СРБ обычно ниже 5-10 мг/л (нормальные значения СРБ индивидуальны и варьируют от 1 до 6 мг/л; эти значения зависят от возраста, пола, физиологического состояния, наличия хронических заболеваний).
Помимо того, что СРБ является белком острой фазы [воспаления], он также является одним из наиболее чувствительных маркеров острого воспаления; однако, в связи с низкой специфичностью и значительной его межиндивидуальной вариацией, необходимо с большой осторожностью подходить к интерпретации данных с учетом полученных ранее значений и уровня содержания в сыворотке других маркеров, а также с учетом полной оценки анамнеза пациента. Таким образом, хотя повышение уровня СРБ в сыворотке крови не является характерным признаком какого-либо определенного (т.е. конкретного) заболевания, он является важным индикатором воспалительного процесса. Повышенные концентрации СРБ отмечаются через 6-12 часов после начала воспалительной реакции и достигают максимальных значений в пределах 48-72 часов. СРБ имеет относительно короткий период полужизни (1-2 дня) и обычно возвращается к норме через 5-10 дней после начала воспаления (и его прекращения). Следует заметить, что определение СРБ является более надежным и чувствительным показателем воспалительного процесса, чем подсчет скорости оседания эритроцитов (СОЭ), на которую могут влиять и физиологические изменения, не связанные с воспалительным процессом. Основным стимулятором (или регулятором) его синтеза являются интерлейкин-6, фактор некроза опухоли, интерлейкин-1.
Физиологическая роль СРБ определяется следующими связанными с ним механизмами:
1. связывается с остатками фосфорил-холина фосфолипидов и особенно с пневмококковым полисахаридом C путем кальцийзависимого механизма;
2. связывается с хроматином и гистоном, принимая участие в клиренсе клеточных остатков;
3. является основным фактором опсонизации: СРБ связывается с фагоцитами и ускоряет фагоцитоз антигенов и микроорганизмов;
4. связывается с фракцией «C1q» комплемента, обуславливая активацию комплемента по классическому пути.
Повышение содержания (концентрации) СРБ является ранним признаком инфекции. Повышение содержания СРБ наиболее выражено при бактериальных, а не вирусных инфекциях. Увеличение содержания отмечается при активном ревматическом процессе, ревматоидном артрите, инфаркте миокарда, остром панкреатите и панкреонекрозе, сепсисе, при злокачественных опухолях. Также определение концентрации СРБ применяется для оценки длительности назначения антибиотиков при антибактерильной терапии. Существует корреляция между повышением СОЭ и СРБ, однако СРБ появляется и исчезает раньше, чем изменяется СОЭ.
Определение СРБ в первичном медицинском звене проводят двум наиболее значимым группам пациентов – лихорадящим пациентам с вероятностью наличия инфекционного заболевания и пациентам с хроническими воспалительными заболеваниями. В стационаре (госпитале) тест на СРБ также применяется для ранней диагностики инфекционных осложнений и эффективности антибактериальной терапии. На осложнение будет указывать тот факт, что в последующие 4–5 дней после операции концентрация СРБ будет продолжать оставаться высокой (или увеличиваться).
Показана прогностическая значимость СРБ (в зависимости от его содержания в крови даже в пределах нормальных значений) в оценке риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и связанных с ними осложнений (при инфаркте миокарда СРБ повышается через 18–36 ч после начала заболевания, к 18–20 дню снижается и к 30–40 дню приходит к норме; при рецидивах инфаркта СРБ вновь повышается). Для этих целей применяется иммуноферментный тест для количественного определения in vitro С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови человека, обозначаемый как метод «С-реактивный белок высокочувствительный» (или hsCRP ELISA), который способен определять даже небольшие концентрации данного белка в сыворотке крови (отражающие вялотекущее воспаление в интиме сосуда) и позволяет проспективно определять риск развития сердечно-сосудистых осложнений, дополняя прогностическую информацию, которую дают классические факторы риска, такие как курение, ожирение, инсулинорезистентность и др.
Тест [hsCRP ELISA] основан на принципе твердофазного непрямого иммуноферментного анализа. В тесте используются уникальные моноклональные антитела, направленные к особой антигенной детерминанте в молекуле СРБ. Эти моноклональные антитела адсорбированы в лунках стандартного микропланшета. При этом ферментный конъюгат представляет собой антитела козы к СРБ, меченные ферментом (пероксидазой хрена). При внесении контролей и разведенных исследуемых сывороток в лунки присутствующий в СРБ одновременно связывается и с иммобилизованными антителами и с ферментным конъюгатом, образуя «сэндвич». После 45-минутной инкубации, несвязавшиеся меченные антитела удаляются промывкой. Добавление субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) и 20[двадцати]-минутная инкубация приводят к развитию голубой окраски, которое останавливается добавлением 1N HCl, при этом окраска меняется с голубой на желтую. При этом интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации СРБ в образце, и может быть измерена спектро-фотометрически при длине волны 450 нм. (!) Каждая лаборатория должна получить свои собственные данные и калибровочную кривую.
Ожидаемые нормальные значения: рекомендуется каждой лаборатории выработать собственные референсные значения; они зависят от популяции пациентов; однако, исходя из опубликованных литературных сведений, у здоровых людей уровень СРБ должен быть следующим: сыворотка новорожденных: 0,01-0,35 мг/л; сыворотка взрослых: 0,068-8,2 мг/л.
Для практикующего врача (например, терапевта на приеме) из-за скорости развития многих заболеваний, при которых важно определение СРБ, возникает необходимость в быстром, легко интерпретируемом, безынструментальном и количественном тесте, пригодном для работы как с сывороткой/плазмой, так и с цельной кровью. Этим требованиям соответствует диагностическая система «НикоКард – СРБ» [NycoCard® C-РБ] («Никомед-Диагностик», Норвегия). Тест «НикоКард – СРБ» работает по иммунометрическому / иммунофильтрационному принципу и состоит из: (1) кроверазводящей и лизирующей (для цельной крови) жидкости; (2) 4 или 8 карточек с шестью отверстиями, содержащими специфические моноклональные антитела против СРБ, иммобилизированные на порах мембраны, которая расположена на абсорбирующей бумаге, и (3) СРБ-специфических моноклональных антител, конъюгированных с ультрачастицами коллоидного золота. Для забора крови из пальца используют стеклянные капилляры, предварительно обработанные антикоагулянтом (цитратом, гепарином или ЭДТА) и высушенные в сушильном шкафу. Полученную кровь разводят реагентом (25 мкл к 1000 мкл), тщательно перемешивают и выдерживают 40-60 сек для лизиса клеток. Затем 25 мкл разведенного образца крови вносят в одно из отверстий пористой мембраны, и после ее полной сорбции наносят по очереди каплю коньюгата и затем промывающего раствора для удаления непрореагировавших компонентов. Стойкое пурпурно-красное окрашивание диаметром 3,5 мм появляется сразу же, если проба содержала СРБ (5-10 мг/л). Концентрацию СРБ можно определить полуколичественно визуально. Быстрое и точное определение концентрации СРБ в мг/л осуществляется с помощью универсального портативного денситометра «НикоКард – Ридер». Вся процедура анализа обычно длится 2-3 мин. Таким образом, диагностическая система «НикоКард – СРБ» позволяет быстро (в течение 2-3 мин) и точно (количественно с помощью «НикоКард – Ридер») оценить наличие воспаления и степень его выраженности, отличить бактериальные инфекции от вирусных, выбрать адекватное лечение воспаления (антибиотики, стероиды, противовоспалительные средства) и контролировать сам процесс лечения. Тест-система показывает хорошую корреляцию с такими широко распространенными лабораторными методами исследования, как турбидиметрия, нефелометрия и иммуноферментный анализ, но значительно превосходит их по эргоемкости, т. е. простоте, экономичности и эффективности.
При интерпретации полученных данных по содержанию СРБ можно придерживаться следующих алгоритмов: (1) для вирусных инфекций, метастазов опухолей, вялотекущих хронических и некоторых системных ревматических заболеваний характерно увеличение концентрации СРБ до 10-30 мг/л; (2) бактериальные инфекции, обострение некоторых хронических воспалительных заболеваний, например, ревматоидного артрита, а также повреждение тканей (хирургическая операция, острый инфаркт миокарда) обычно сопровождаются увеличением концентрации СРБ до 40-100 мг/л, а ряде случаев и до 200 мг/л; (3) тяжелые генерализованные инфекции, ожоги, сепсис приводят к увеличению концентрации СРБ до 300 мг/л и более.
СРБ состоит из пяти отдельных субъединиц, образующих за счет нековалентных связей циклическую пентамерную структуру с молекулярной массой, варьирующей от 110000 до 140000 Да. СРБ, синтезируется в печени и присутствует в крови в норме практически у всех здоровых лиц (около 1 мкг/мл) при отсутствии воспалительного процесса. У здоровых индивидуумов уровень сывороточного СРБ обычно ниже 5-10 мг/л (нормальные значения СРБ индивидуальны и варьируют от 1 до 6 мг/л; эти значения зависят от возраста, пола, физиологического состояния, наличия хронических заболеваний).
Помимо того, что СРБ является белком острой фазы [воспаления], он также является одним из наиболее чувствительных маркеров острого воспаления; однако, в связи с низкой специфичностью и значительной его межиндивидуальной вариацией, необходимо с большой осторожностью подходить к интерпретации данных с учетом полученных ранее значений и уровня содержания в сыворотке других маркеров, а также с учетом полной оценки анамнеза пациента. Таким образом, хотя повышение уровня СРБ в сыворотке крови не является характерным признаком какого-либо определенного (т.е. конкретного) заболевания, он является важным индикатором воспалительного процесса. Повышенные концентрации СРБ отмечаются через 6-12 часов после начала воспалительной реакции и достигают максимальных значений в пределах 48-72 часов. СРБ имеет относительно короткий период полужизни (1-2 дня) и обычно возвращается к норме через 5-10 дней после начала воспаления (и его прекращения). Следует заметить, что определение СРБ является более надежным и чувствительным показателем воспалительного процесса, чем подсчет скорости оседания эритроцитов (СОЭ), на которую могут влиять и физиологические изменения, не связанные с воспалительным процессом. Основным стимулятором (или регулятором) его синтеза являются интерлейкин-6, фактор некроза опухоли, интерлейкин-1.
Физиологическая роль СРБ определяется следующими связанными с ним механизмами:
1. связывается с остатками фосфорил-холина фосфолипидов и особенно с пневмококковым полисахаридом C путем кальцийзависимого механизма;
2. связывается с хроматином и гистоном, принимая участие в клиренсе клеточных остатков;
3. является основным фактором опсонизации: СРБ связывается с фагоцитами и ускоряет фагоцитоз антигенов и микроорганизмов;
4. связывается с фракцией «C1q» комплемента, обуславливая активацию комплемента по классическому пути.
Повышение содержания (концентрации) СРБ является ранним признаком инфекции. Повышение содержания СРБ наиболее выражено при бактериальных, а не вирусных инфекциях. Увеличение содержания отмечается при активном ревматическом процессе, ревматоидном артрите, инфаркте миокарда, остром панкреатите и панкреонекрозе, сепсисе, при злокачественных опухолях. Также определение концентрации СРБ применяется для оценки длительности назначения антибиотиков при антибактерильной терапии. Существует корреляция между повышением СОЭ и СРБ, однако СРБ появляется и исчезает раньше, чем изменяется СОЭ.
Определение СРБ в первичном медицинском звене проводят двум наиболее значимым группам пациентов – лихорадящим пациентам с вероятностью наличия инфекционного заболевания и пациентам с хроническими воспалительными заболеваниями. В стационаре (госпитале) тест на СРБ также применяется для ранней диагностики инфекционных осложнений и эффективности антибактериальной терапии. На осложнение будет указывать тот факт, что в последующие 4–5 дней после операции концентрация СРБ будет продолжать оставаться высокой (или увеличиваться).
Показана прогностическая значимость СРБ (в зависимости от его содержания в крови даже в пределах нормальных значений) в оценке риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и связанных с ними осложнений (при инфаркте миокарда СРБ повышается через 18–36 ч после начала заболевания, к 18–20 дню снижается и к 30–40 дню приходит к норме; при рецидивах инфаркта СРБ вновь повышается). Для этих целей применяется иммуноферментный тест для количественного определения in vitro С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови человека, обозначаемый как метод «С-реактивный белок высокочувствительный» (или hsCRP ELISA), который способен определять даже небольшие концентрации данного белка в сыворотке крови (отражающие вялотекущее воспаление в интиме сосуда) и позволяет проспективно определять риск развития сердечно-сосудистых осложнений, дополняя прогностическую информацию, которую дают классические факторы риска, такие как курение, ожирение, инсулинорезистентность и др.
Тест [hsCRP ELISA] основан на принципе твердофазного непрямого иммуноферментного анализа. В тесте используются уникальные моноклональные антитела, направленные к особой антигенной детерминанте в молекуле СРБ. Эти моноклональные антитела адсорбированы в лунках стандартного микропланшета. При этом ферментный конъюгат представляет собой антитела козы к СРБ, меченные ферментом (пероксидазой хрена). При внесении контролей и разведенных исследуемых сывороток в лунки присутствующий в СРБ одновременно связывается и с иммобилизованными антителами и с ферментным конъюгатом, образуя «сэндвич». После 45-минутной инкубации, несвязавшиеся меченные антитела удаляются промывкой. Добавление субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) и 20[двадцати]-минутная инкубация приводят к развитию голубой окраски, которое останавливается добавлением 1N HCl, при этом окраска меняется с голубой на желтую. При этом интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации СРБ в образце, и может быть измерена спектро-фотометрически при длине волны 450 нм. (!) Каждая лаборатория должна получить свои собственные данные и калибровочную кривую.
Ожидаемые нормальные значения: рекомендуется каждой лаборатории выработать собственные референсные значения; они зависят от популяции пациентов; однако, исходя из опубликованных литературных сведений, у здоровых людей уровень СРБ должен быть следующим: сыворотка новорожденных: 0,01-0,35 мг/л; сыворотка взрослых: 0,068-8,2 мг/л.
Для практикующего врача (например, терапевта на приеме) из-за скорости развития многих заболеваний, при которых важно определение СРБ, возникает необходимость в быстром, легко интерпретируемом, безынструментальном и количественном тесте, пригодном для работы как с сывороткой/плазмой, так и с цельной кровью. Этим требованиям соответствует диагностическая система «НикоКард – СРБ» [NycoCard® C-РБ] («Никомед-Диагностик», Норвегия). Тест «НикоКард – СРБ» работает по иммунометрическому / иммунофильтрационному принципу и состоит из: (1) кроверазводящей и лизирующей (для цельной крови) жидкости; (2) 4 или 8 карточек с шестью отверстиями, содержащими специфические моноклональные антитела против СРБ, иммобилизированные на порах мембраны, которая расположена на абсорбирующей бумаге, и (3) СРБ-специфических моноклональных антител, конъюгированных с ультрачастицами коллоидного золота. Для забора крови из пальца используют стеклянные капилляры, предварительно обработанные антикоагулянтом (цитратом, гепарином или ЭДТА) и высушенные в сушильном шкафу. Полученную кровь разводят реагентом (25 мкл к 1000 мкл), тщательно перемешивают и выдерживают 40-60 сек для лизиса клеток. Затем 25 мкл разведенного образца крови вносят в одно из отверстий пористой мембраны, и после ее полной сорбции наносят по очереди каплю коньюгата и затем промывающего раствора для удаления непрореагировавших компонентов. Стойкое пурпурно-красное окрашивание диаметром 3,5 мм появляется сразу же, если проба содержала СРБ (5-10 мг/л). Концентрацию СРБ можно определить полуколичественно визуально. Быстрое и точное определение концентрации СРБ в мг/л осуществляется с помощью универсального портативного денситометра «НикоКард – Ридер». Вся процедура анализа обычно длится 2-3 мин. Таким образом, диагностическая система «НикоКард – СРБ» позволяет быстро (в течение 2-3 мин) и точно (количественно с помощью «НикоКард – Ридер») оценить наличие воспаления и степень его выраженности, отличить бактериальные инфекции от вирусных, выбрать адекватное лечение воспаления (антибиотики, стероиды, противовоспалительные средства) и контролировать сам процесс лечения. Тест-система показывает хорошую корреляцию с такими широко распространенными лабораторными методами исследования, как турбидиметрия, нефелометрия и иммуноферментный анализ, но значительно превосходит их по эргоемкости, т. е. простоте, экономичности и эффективности.
При интерпретации полученных данных по содержанию СРБ можно придерживаться следующих алгоритмов: (1) для вирусных инфекций, метастазов опухолей, вялотекущих хронических и некоторых системных ревматических заболеваний характерно увеличение концентрации СРБ до 10-30 мг/л; (2) бактериальные инфекции, обострение некоторых хронических воспалительных заболеваний, например, ревматоидного артрита, а также повреждение тканей (хирургическая операция, острый инфаркт миокарда) обычно сопровождаются увеличением концентрации СРБ до 40-100 мг/л, а ряде случаев и до 200 мг/л; (3) тяжелые генерализованные инфекции, ожоги, сепсис приводят к увеличению концентрации СРБ до 300 мг/л и более.