Статьи Лабораторная диагностика
|
|
|
|
Лабораторная диагностика вирусного гепатита С
… особое положение вирусного гепатита С среди других гепатитов обусловлено катастрофическим ростом инфицированности вирусом гепатита С населения и особенно молодежи, что связывают с ростом шприцевой наркомании.Вирус гепатита С или HCV (Hepatitis C Virus) относится к семейству флавовирусов. Геном вируса представлен однонитчатой позитивной РНК, состоящих из 10 000 нуклеотидных оснований, образующих регионы, которые кодируют три структурных белка (С, Е1, Е2) и пять неструктурных (NS2, NS3, NS4, NS5). Особенностью HCV является чрезвычайно высокая гетерогенность его генома. Анализ нуклеиновых кислот РНК HCV различных изолятов выявил существенные отличия в их первичной структуре. На основании этих данных была построена классификация HCV, разделяющая его на варианты и субтипы-генотипы, одни из которых присутствуют во всех регионах мира, а другие только в отдельных странах.
Учитывая, что при HCV вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-HCV, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1). Таким образом, лабораторная диагностика HCV основывается на обнаружении серологических маркерв HCV: антител к HCV (анти- HCV, анти- HCV класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК- HCV методом ПЦР.
С целью скрининговой диагностики HCV применяют определение так называемых общих антител к HCV (Anti-HCV), поскольку положительных результатов данного исследования ограничена - наличие общих антител к HCV позволяет лишь констатировать факт контакта пациента с вирусом гепатита С и не позволяет судить о давности процесса, а также о его прогрессировании или о завершенности (не может служить показателем выздоровления больного). Также не отмечается и корреляции с выраженностью клинического течения HCV-инфекции. Таким образом, обнаружение только общих антител к HCV дает основание для дальнейшего комплексного, в том числе специфического лабораторного обследования. (!) Общие антитела к вирусу гепатита С сохраняются в организме неограниченное время.
При положительном результате обследования пациента на антитела к HCV и отсутствии клинической картины гепатита необходимо направить пациента к инфекционисту. Для получения более полной характеристики следует провести дополнительное обследование: (1) биохимическое исследование крови (т. н. печеночные пробы - АЛТ, АСТ, ГГТП (g-глутамилтранспептидаза), холестерин, билирубин и т. д.); (2) раздельное определение антител к HCV; (3) исследование крови на РНК вируса (ПЦР) и при его обнаружении: определение генотипа и титра; (4) желательно также ультразвуковое исследование органов брюшной полости.
Специфическая лабораторная диагностика HCV-инфекции основана на: (1) обнаружении специфических антител к основным антигенам вируса и (2) определении РНК вируса, его количества и генотипа.
Антитела класса IgG к вирусу гепатита С (анти-HCV IgG) свидетельствуют о возможной инфицированности HCV или перенесенной инфекции (определяются в скрининговых исследованиях). В свою очередь антитела класса IgG к ядерным белкам HCV (анти-HCV core IgG) свидетельствуют об инфицированности HCV или перенесенной инфекции.
Антитела класса IgM к HCV, определяемые иммуноферментным методом, позволяют говорить не только об инфицировании HCV, но с определенной долей достоверности об острой фазе инфекции или обострении хронического гепатита, несмотря на отсутствие симптомов болезни и гиперферментемии АЛТ, АСТ.
Следует отметить, что к настоящему времени разработаны четыре поколения тест-систем для выявления анти- HCV в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. Иммуноферментные тест-системы третьего поколения для определения антител к HCV, где в качестве связывающего антигена на твердой фазе используются иммунореактивные синтетические пептиды, являются достаточно чувствительными и информативными, а их широкое использование повысило процент выявления лиц, инфицированных HCV.
Вирусная РНК выявляется в цитоплазме большинства гепатоцитов печени уже на первой-второй неделе заражения. В последующем количество вирусных частиц периодически может увеличиваться, но это не всегда коррелирует с наличием РНК в сыворотке крови или со степенью воспалительных изменений в печени. Максимально виремия наблюдается в начале острого периода болезни. Антитела появляются спустя 6–12 недель от начала развития гепатита. Прежде всего выявляются антитела к структурным (связанным с ядерным белком) протеинам, а затем - к неструктурным белкам - NS3, NS4 и NS5 регионов геномa.
Определение рибонуклеиновой кислоты HCV (или HCV-RNA) проводится с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции), которая позволяет с высокой степенью точности показать присутствие или отсутствие вирусной РНК в крови. Метод ПЦР позволяет определить вирусный генотип и его подтип, а также количество РНК (титр или количество генокопий в мл).
Определение генотипа HCV и его титра (т.н. полуколичественное исследование) в крови пациента используется как для диагностики HCV-инфекции, так и для дополнительной оценки активности вирусного процесса и для контроля эффективности комплексного, в том числе противовирусного лечения. Интерпретация полученных результатов ПЦР оценивается следующим образом: 1 + (1:1) и 2 + (1:10) - вирусная РНК определяется в низком титре, уровень виремии низкий, 3 + (1:100) - средний уровень виремии и наконец 4 + (1:1000) и 5 + (1:10000) - высокий уровень виремии.
Следует указать на то, что недостатком этого метода является его (!) технологическая сложность и достаточно высокие в настоящее время экономические затраты, что не позволяет широко внедрить его в массовое лабораторное обследование.
Результаты такого обследования в совокупности с данными эпиданамнеза и физикального обследования на первом этапе помогут выработать правильную тактику лечения и ведения конкретного пациента. Нередко встречаются ситуации, когда результаты комплексного обследования не выявляют никаких отклонений, кроме обнаружения антител к HCV. В этих случаях правомочно говорить о перенесенной ранее субклинической форме HCV-инфекции. Однако, учитывая существующую вероятность реактивации (репликации) вируса, следует поставить больного на диспансерный учет и 2–4 раза в год проводить выборочное лабораторное обследование. Подобные рекомендации даются и пациенту, перенесшему манифестную форму HCV.