Статьи Лабораторная диагностика
|
|
|
|
Бактериемия, фунгиемия (бактериологическое исследование крови)
… бактериологическое исследование - совокупность методов, применяемых для обнаружения и установления природы бактерий, выделенных от больных, бактерионосителей или из объектов окружающей среды.Кровь – является одним из наиболее распространенных материалов, используемых для бактериологического исследования. В норме кровь ! стерильна, наличие в ней бактерий (бактериемия) или грибов (фунгиемия) является патологией.
Исследование крови проводится при:
• лихорадке (температура тела 38°С и выше) неясного генеза;
• гипотермии (температура тела 36°С и ниже);
• лейкоцитозе (сдвиг лейкоцитарной формулы влево);
• гранулоцитопении.
Бактериемия:
• является характерной особенностью течения брюшного тифа, бруцеллеза, лептоспироза;
• транзиторная бактериемия возникает при различных инфекциях, травмах или раневых инфекциях и др.; всегда проходит спонтанно при отсутствии иммунодефицита;
• длительная бактериемия характерна для ангиогенных инфекций (инфицированная аневризма, эндокардит, тромбофлебит);
• бактериемия, а также фунгиемия могут развиваться при внутривенном введении лекарственных средств; в этом случае они наиболее часто обусловлены «оппортунистическими микроорганизмами;
• бактериемия (фунгиемия) и сепсис могут быть вызваны практически всеми микроорганизмами: как патогенными, так и «оппортунистическими» бактериями и грибами.
По возможности кровь следует брать до назначения противомикробных средств. Если же антибактериальная терапия уже проводится, то кровь следует забирать непосредственно перед очередным введением (приемом) лекарственного средства. ! Оптимальное время взятия пробы крови – при ознобе ил на подъеме температурной реакции.
Как правило, забираются две пробы из вен разных рук с интервалом 30 минут. С целью ! повышения вероятности выделения возбудителя в течение одного часа следует произвести забор трех проб крови из разных вен. Получение образца крови из катетера, кроме тех случаев, когда имеется подозрение на наличие катетер-ассоциированной инфекции, или невозможен забор крови из вены – не допускается.
Количество крови для одной пробы составляет:
• у взрослых – 10,0 мл;
• у детей – от 2,0 до 5,0 мл;
• у новорожденных и детей неонатального периода – от 1,0 до 2,0 мл.
Участок кожи над веной, откуда будет взята кровь, предварительно дезинфицируют настойкой йода, 10% поливидон-йоданата, 70% спиртом или 0,5% раствором хлоргексидина в 70% спирте. При этом дезинфектант должен испариться с кожи до взятия пробы. Следует отметить, что даже после тщательной обработки кожных покровов в глубоких слоях кожи могут остаться S. epidermidis, Propionibacterium acnes и др., которые впоследствии могут попасть в образцы крови (псевдобактериемия). Псевдобактериемия может встречаться при контаминации антисептических растворов, шприцев или игл, используемых при взятии анализа крови.
(для культивирования образцов крови)
В качестве питательной среды для культивирования образцов крови обычно используется жидкая питательная основа, обеспечивающая условия роста всех видов клинически значимых бактерий и грибов. Согласно рекомендации ВОЗ, это ! триптиказо-соевый бульон (ТСБ). Однако отечественные нормативы допускают использование и других питательных сред.
Кровь смешивают с бульоном в соотношении 1 : 10 (10,0 мл крови и 100,0 мл бульона), далее:
• если предполагается выделить из образца крови только аэробные бактерии или грибы, то флаконы следует предварительно разгерметизировать, проткнув простерилизовную мембрану (крышку);
• при исследовании образца крови на бруцеллы и другие медленно растущие микроорганизмы рекомендуется использовать так называемые двухфазные флаконы, заполненные бульоном (жидкая фаза) и скошенным агаром (твердая фаза).
(!) Для приготовления бульона и агара следует использовать ТСБ. при этом газовая среда флакона должна быть насыщена двуокисью углерода.
Частота выделения микроорганизмов из крови при использовании флаконов лабораторного приготовления ниже, чем при использовании готовых флаконов промышленного производства, поскольку последние:
• содержат стандартную питательную основу (сывороточные белки, аминокислоты и ростовые добавки);
• имеют постоянную газовую атмосферу и антикоагулянт, нейтрализующий бактерицидное действие сыворотки.
Основными этапами анализа являются:
• посев;
• субкультивирование.
Посев полной бактериологичесой петли проросшего бульона производят на шоколадный или кровяной агар, или на среду Сабуро (грибы). Инкубация, как правило, длится 7 – 10 дней. Большие сроки инкубации целесообразны при:
• подозрении на наличие бруцелл или других требовательных к питательным средам микроорганизмам;
• наличии эндокардита;
• проводимой антибиотикотерапии.
Следует отметить, что пневмококки имеют тенденцию к автолизу и быстро погибают. В связи с последним обстоятельством субультивирование для их обнаружения рекомендуется проводить через каждые 48 ч на шоколадном агаре путем инкубации посевов в течение 18 – 24 часов или использовать флаконы с двухфазной средой. Истинные патогенны могут быть отдиффренцированы от контаминантов, если имеет место:
• рост одного и того же микроорганизма в двух флаконах при посеве проб крови от одного пациента, взятых с интервалом во времени;
• обнаружение одного и того же микроорганизма в посевах двух и более проб крови;
• рост микроорганизма в течение 48 ч;
• появление одинаковых свойств и чувствительности к антибиотикам у разных изолятов, полученных из одной пробы крови;
• выделение двух и более микробов, что может свидетельствовать как о полимикробной бактериемии, так и о контаминации пробы.
Для определения чувствительности к антибиотикам энтеробактерий и стафилококков обычно используют метод Керби-Баура. С целью определения чувствительности к антибиотикам (количественное определение минимальной подавляющей концентарции) стрептококков (в том числе и пневомкокков), не ферментирующих грамотрицательныех палочек, а также гемофильной палочки и дрожжеподобных грибов рекомендуется использовать коммерческие тест-системы («стрипы»).