Гистология. Атлас для практических занятий. Учебное пособие. : Бойчук Н.В., Исламов Р.Р., Кузнецов С.Л., Челышев Ю.А. 2008г. - 160 с. : ил
|
|
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Микроскоп. Этот
оптический прибор позволяет наблюдать мелкие объекты. Увеличение
изображения достигается системой линз объектива и окуляра. Зеркало,
конденсор и диафрагма направляют световой поток и регулируют освещение
объекта. Механическая часть микроскопа включает: штатив, предметный
столик, макро- и микрометрический винты, тубус, тубусодержатель.
Ротационный микротом. Блоки,
содержащие кусочек органа, закрепляют в подвижном объектодержателе. При
его опускании на ноже остаются серийные срезы, их снимают с ножа и
монтируют на предметное стекло для последующей обработки и
микроскопирования.
Соотношения между реальными трёхмерными структурами и их срезами, дающими двухмерные изображения. На
рисунке показаны различные сечения изогнутой трубчатой структуры
(например, кишки). Стрелки указывают, как отдельные элементы трёхмерного
(3D) объекта представлены в двухмерном (2D) изображении на
гистологическом препарате.
Направления сечений и используемые термины (на примере зародыша человека). А, Б - вид спереди (вентральная сторона) 6-недельного эмбриона; В - вид сбоку (латеральная сторона) 7-недельного эмбриона.
Иммуноцитохимическая реакция. А -
Прямой метод предполагает использование меченых антител против
интересующего антигена. Антитела взаимодействуют с антигенами в местах
их локализации. Эти места выявляют при помощи метки, связанной с
антителами; Б - Непрямой метод предполагает использование двух
различных антител. Первые антитела реагируют с антигенами ткани.
Связанные с меткой вторые антитела специфически взаимодействуют с
первыми
антителами, которые для вторых антител являются антигеном. Метод значительно чувствительнее прямого, так как с каждой молекулой первых антител связывается несколько молекул вторых антител, содержащих метку (например, пероксидазу).
Мотонейроны спинного мозга. Клетки
прореагировали с антителами к белку теплового шока (Hsp - heat shock
protein). Hsp - молекулы-шапероны, отвечают за транспорт белков, их
нативную конформацию, транслокацию белков через мембраны, контролируют
образование трёхмерной структуры белка, предотвращают агрегацию белков.
Сортировка клеток методом проточной цитометрии. В
культуральной среде специфические антитела, конъюгированные с
флуоресцентным зондом, связываются с антигеном на поверхности клеток
(например, с CD34+ на мембране стволовой кроветворной клетки). Под
давлением клетки проходят по капилляру, где меченые CD34+ клетки под
действием лучей лазера получают отрицательный электрический заряд. В
электрическом поле происходит разделение клеток, несущих положительный
или отрицательный заряд.
Гибридизация in situ. ДНК-
зонд связывается с комплементарным участком информационной РНК в исследуемом образце. Визуализация связанного с меткой ДНК-зонда указывает на экспрессию гена-мишени в конкретном клеточном типе.
Гибридизация in situ. Стрелками указаны участки локализации Y-хромосомы, ДНКзонд: ген sry. Свежезамороженный срез. [6]
Окрашивание ядер при помощи красителя DAPI (4,6-диамидино-2-фенилиндол
дигидрохлорид). DAPI образует флюоресцирующий комплекс с ДНК.
Возбуждающий ультрафиолетовый свет вызывает люминесценцию голубого
цвета. На препарате выявлены ядра эпителиальных клеток лёгочных альвеол.
Мотонейрон спинного мозга. Для
изучения аксонного транспорта применяются молекулы-трэйсеры,
транспортирующиеся по аксону в антероградном или ретроградном
направлениях. На препарате ретроградный флуоресцентный зонд FluoroGold
характеризует дендриты и перикарион двигательного нейрона.