Сообщество студентов Кировской ГМА

Учеба => Кафедры - учебные материалы => Микробиология и вирусология => Тема начата: Lux от Марта 26, 2011, 15:52:06

Название: Морфология микроорганизмов Занятие №3
Отправлено: Lux от Марта 26, 2011, 15:52:06
Ультраструктура и химический состав бактериальной клетки. Сложные методы окраски.
Основы морфологии бактерий.
Содержание:
  ФОРМА БАКТЕРИЙ.  РАЗМЕР БАКТЕРИЙ.

Отдельным видам бактерий с достаточным постоянством присущи определенные формы и размер.
Выделяют три основные формы бактерийшаровидные, палочковидные и извитые.

Шаровидные бактерии, или кокки
Формашаровидная или овальная.
По характеру расположения клеток в мазках выделяют:
Микрококки – отдельно расположенные клетки.
Диплококки – располагаются парами.
Стрептококки – клетки округлой или вытянутой формы, составляющие цепочку.
Сарцины – располагаются в виде «пакетов» из 8 и более кокков.
Стафилококки – кокки, расположенные в виде грозди винограда в результате деления в разных плоскостях.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/nfVREnterococcus.jpg)
Рис. 1. Шаровидные бактерии (энтерококки). Электронная микрофотография (ЭМ).

Палочковидные  бактерии
Форма палочковидная, концы клетки могут быть заостренными, закругленными, обрубленными, расщепленными, расширенными. Палочки могут быть правильной и неправильной формы, в том числе ветвящиеся, например у актиномицетов.
По характеру расположения клеток в мазках выделяют:
Монобактерии – расположены отдельными клетками.
Диплобактерии – расположены по две клетки.
Стрептобактериии – после деления образуют цепочки клеток.
Палочковидные бактерии могут образовывать споры: бациллы и клостридии.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/ecoli_bacteria.jpg)
Рис. 2. Палочковидные бактерии (кишечная палочка). ЭМ.

Извитые  бактерии
Форма   - изогнутое тело в один или несколько оборотов.
Вибрионыизогнутость тела не превышает одного оборота.
Спирохетыизгибы тела в один или несколько оборотов.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/V.cholerae.jpg)
Рис. 3. Извитые бактерии (холерный вибрион). ЭМ.
 Размер бактерий Микроорганизмы измеряются в микрометрах и нанометрах.
Средние размеры бактерий – 2 – 3 х 0,3 – 0,8 мкм.
Форма и размер - важный диагностический признак.
Способность бактерий изменять свою форму и величину называется полиморфизм.

СТРОЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ

Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы с включениями и так называемым нуклеоидом. Имеются дополнительные структуры: капсула,микрокапсула, жгутики, пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях способны образовывать споры.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/protobact-2.jpg)
Рис. 4. Строение бактериальной клетки (схема). Сapsule - капсула; Сell wall - клеточная стенка;Cytoplasmic membrane - цитоплазматическая мембрана; Mesosome - мезосома; Flagellum - жгутик;Pili - пили; Cytoplasma - цитоплазма; Nucleoid - нуклеоид; Ribosomes - рибосомы; Granular inclusion- включения.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/bac_cell.gif)
Рис. 5. Определите форменные элементы бактериальной клетки.
Грамположительные бактерии имеют толстую (многослойную) клеточную стенку.
Окрашиваются по Граму в фиолетовый цвет .
Грамотрицательные бактерии имеют тонкую клеточную стенку, прикрытую снаружи тройным липидсодержащим слоем (внешняя мембрана).
Окрашиваются по Граму в красный цвет.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/gram-pos-2.-jpg.jpg)
Рис. 6. Строение клеточной стенки грамположительных (А) и грамотрицательных (Б) бактерий(схема). У грамположительных бактерий (А) основной слой - пептидогликан - многослойный и пронизан тейхоевыми кислотами (толстая клеточная стенка); у грамотрицательных бактерий (Б) тонкий пептидогликан и над ним расположена внешняя мембрана, содержащая липиды (тонкая клеточная стенка).
Тинкториальные свойства – восприимчивость микроорганизмов к различным красителям.
L-формы – бактерии, полностью лишенные клеточной стенки и способные размножаться.
Споры и спорообразование
Споры бактерий - своеобразная форма покоящихся бактерий, форма сохранения наследственной информации в неблагоприятных условиях внешней среды и не является способом размножения, как у грибов.
Процесс спорообразования: спорогенная зона - проспора -  спора.
В благоприятных условиях споры прорастают за 4-5 часов. Образуют споры в течение 18-20 часов.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/spore-ml.-2.-jpg.jpg)(http://med-kirov.narod.ru/ot2/anthrax.small.jpg)
Рис. 7. Спора внутри бактериальной клетки (ЭМ). Рис. 8. Споры сибиреязвенной палочки(светооптическая микроскопия, СМ).

ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ ГРУПП БАКТЕРИЙ

Спирохеты – тонкие, длинные, извитые (спиралевидной формы), грамотрицательные бактерии. Размеры клеток 0,05-3 х 5-500 мкм. Спирохеты имеют наружную мембрану клеточной стенки, окружающую протоплазматический цилиндр с цитоплазматической мембраной. Под наружной мембраной клеточной стенки (в периплазме) расположены фибриллы (жгутики), которые, как бы закручиваясь вокруг протоплазматического цилиндра спирохеты, придают ей винтообразную форму.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/treponema.jpg)
Рис. 9. Спирохеты (ЭМ).

Риккетсии мелкие, грамотрицательные палочковидные бактерии (0,3-2,0 мкм), облигатные внутриклеточные паразиты.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/image006rickettsia.jpg) (http://med-kirov.narod.ru/ot2/rickettsia_incell.jpg)
Рис. 10. Риккетсии (слева - структура клетки; справа - риккетсии внутри клетки).

Хламидии относятся к облигатным внутриклеточным кокковидным грамотрицательным бактериям. Они размножаются только в живых клетках. Вне клеток имеют сферическую форму - элементарные тельца (ЭТ), не активны, являются инфекционными агентами. Внутриклеточная форма - ретикулярные тельца (РТ).
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/chlamidia-web.jpg) (http://med-kirov.narod.ru/ot2/chlamydia.small.jpg)
Рис. 11. Хламидии (ЭТ - элементарные тельца; РТ - ретикулятные тельца), (фото слева, ЭМ).Хламидии внутри клеток (фото справа, СМ).

Микоплазмы – мелкие бактерии (0,15-1,0 мкм), окруженные цитоплазматической мембраной и не имеющие клеточной стенки. Имеют разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/mycoplasma.jpg)
Рис. 12. Микоплазмы (ЭМ).
Актиномицеты – ветвящиеся, нитевидные или палочковидные грамположительные бактерии. Свое название они получили в связи с образованием в пораженных тканях друз – гранул из плотно переплетенных нитей в виде лучей, отходящих от центра и заканчивающихся колбовидными утолщениями. Актиномицеты могут делиться путем фрагментации мицелия на клетки, похожие на палочковидные и кокковидные бактерии. На воздушных гифах актиномицетов могут образовываться споры, служащие для размножения.
(http://med-kirov.narod.ru/ot2/actinimyces.jpg)
Рис. 13. Актиномицеты (СМ).
 Окраска по Граму Данный вид окраски мазков является основным при проведении микроскопии препаратов. Для проведения окраски необходимы следующие реактивы:

1. 1% водный раствор кристаллвиолета. 1 грамм кристаллвиолета растворяется в 100 мл кипящей дистиллированной воды, после чего фильтруется через бумажный фильтр.
2. Водный раствор Люголя, который получают путем растворения 2 грамм йодида калия в 300 мл дистиллированной воды и далее в этом растворе растворяют 1 грамм чистого йода. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр.
3. 96% этиловый спирт.
4. Водный 1% раствор нейтрального красного. Метод окраски таков: препарат покрывается фильтровальной бумагой и заливается раствором кристаллвиолета на 1 минуту. Затем фильтровальную бумагу удаляют, и предметное стекло промывают проточной водой. После чего препарат заливают раствором Люголя на несколько секунд. Излишки раствора Люголя смывают, и препарат обесцвечивают путем погружения стекла в спирт (несколько раз). Еще раз промывают препарат и докрашивают раствором нейтрального красного в течение 3 – х минут. После высушивания препарат подвергается визуализации под микроскопом. Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в красно-розовый. Окраска по Цилю — Нильсену — наиболее употребительный метод окраски микобактерий туберкулеза. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, не превышающий по размерам предметное стекло; наливают фуксин Циля и осторожно нагребают на горелке до отхождения паров, после чего оставляют краситель, пока препарат несколько остынет. Снимают бумагу с фуксином, ополаскивают препарат водой, опускают препарат в стаканчик с 5% раствором серной кислоты или смесью 10 частей спирта и 1 части соляной кислоты, прополаскивают до обесцвечивания. Тщательно промывают водой. Докрашивают любым раствором метиленового синего в течение 3—5 минут. Мазок, окрашенный по Цилю — Нильсену, вместо докраски метиленовым синим можно протравливать насыщенным раствором пикриновой кислоты (по Шпенглеру).
Кислото- и спиртоустойчивые палочки принимают красный цвет, все остальные микробы — синий.